環境Q&A

No.26579 【A-3】

Re:サテライトコロニー

2008-01-16 13:01:15 でるた （ZWl8511

培養時間はどのくらいでしょうか？
余り長い時間培養していると、サテライトコロニーが出現してしまいます。

16時間ぐらいが適当な培養時間だと思います。
ブルーコロニーの数を多くしたいがため、極端に長い時間(24時間とか）培養していないでしょうか。
まずは培養時間の検討をされたらいかがでしょう。

それでもだめなら、出てきたブルーコロニーを使い、シングルコロニーアイソレーションで、確認してはどうでしょう。

ブルーコロニーを滅菌した爪楊枝の先でつついて、用意しておいた一枚のプレートに短い線を引く様な感じで10個ぐらいのコロニーを拾い、植えていきます。
それを培養して、ブルーの線状に生えてきたものが、当たりです。

No.26573 【A-2】

Re:サテライトコロニー

2008-01-15 20:21:44 生物屋 （ZWl9b22

>今大腸菌の実験をしているりやんです。
>大腸菌の実験といいましても、「形質転換」をやっています。
>大腸菌の中にpUC19を入れて、アンピシリンが入っていても増えるか・・・のようなものです。
>ちなみにpUC19の中にはAmprとlacZが含まれており、pUC19が入っている大腸菌ではアンピシリンをAmprがやっつけて,X-galとIPTGを入れているので、アンピシリンが入っている培地でも育ち、コロニーの色は青色です。しかし、そのコロニーの周りに小さい白いコロニーが・・・サテライトコロニーです。
>調べていくとAｍｐｒが入っていないものだと分かりましたが、実験で証明するにはどうしたらいいのでしょうか？
>私の考えでは、いつもぬけていて・・・これだったらpUC19が確実に入っているとはわからないだなんて言われます。
>まだまだサテライトコロニーについてはあまり記事が少ないのでよろしくお願いします。
>何か実験方法の提案よろしくお願いします。
>
>

アンピシリン自体は、大腸菌の増殖抑制に働き、大腸菌を殺す訳ではありません。

サテライトコロニーの出現は、Ampr保有菌により周辺のアンピシリン濃度が低下し、
増殖抑制効果が弱まったために、Amprを保有しない菌も発育してきた結果です。

Amprを保有しない（＝pUC19が導入されていない）から、
コロニーも白色になる（＝lacZにより青色を呈しない）訳です。

アンピシリンでなく、大腸菌を殺すタイプの抗生物質で試してみては？
サテライトの出現率はかなり低下するはずですが。

No.26567 【A-1】

Re:サテライトコロニー

2008-01-15 13:31:12 珠 （ZWla258

>今大腸菌の実験をしているりやんです。
>大腸菌の実験といいましても、「形質転換」をやっています。
>大腸菌の中にpUC19を入れて、アンピシリンが入っていても増えるか・・・のようなものです。
>ちなみにpUC19の中にはAmprとlacZが含まれており、pUC19が入っている大腸菌ではアンピシリンをAmprがやっつけて,X-galとIPTGを入れているので、アンピシリンが入っている培地でも育ち、コロニーの色は青色です。しかし、そのコロニーの周りに小さい白いコロニーが・・・サテライトコロニーです。
>調べていくとAｍｐｒが入っていないものだと分かりましたが、実験で証明するにはどうしたらいいのでしょうか？
>私の考えでは、いつもぬけていて・・・これだったらpUC19が確実に入っているとはわからないだなんて言われます。
>まだまだサテライトコロニーについてはあまり記事が少ないのでよろしくお願いします。
>何か実験方法の提案よろしくお願いします。
>

たぶんココの掲示板は専門外だと思います。
水処理屋、処理場設計屋、環境分析屋等々が主っぽいので
大腸菌関係だと菌数測定関係程度なら
回答してくれる方もいらっしゃると思いますが
プラスミド使った遺伝子組み換えは･･･

いい意味でも悪い意味でも
培地作成にメスフラスコを使う人が多そうな掲示板ですので･･･
（かくいう私も今はそのジャンルの人間ですが（笑））

中には広ジャンルの方もいらっしゃるので
待っていればレスが付くかもしれませんが、
急ぎの質問なら別の掲示板捜したほうが早いと思いますよ〜。

（資材購入先の株屋、蛋白屋もしくは遺伝子屋に聞いたほうが早いかも）
















アンピシリンの濃度を変えてもサテライトコロニーの形成は同じ？